Prof. Angelo Poletti
Istituto di Endocrinologia, Universita' di Milano,
via Balzaretti 9, 20133 Milano. tel. 02-5031.8215 fax. 02-5031.8204

Scopo del corso:

Fornire agli studenti iscritti al terzo anno del corso di laurea in biotecnologie farmaceutiche un'adeguato approfindimento delle tecniche utilizzate per la crescita e la manipolazione di cellule "in vitro" e sull'utilizzo dei diversi tipi di coltura cellulare in campo biotecnologico.

Introduzione al corso:
    Linee cellulari primarie
        ottenimento e mantenimento. Disaggregazione dei tessuti e colture primarie. Separazione e caratterizzazione di specifici tipi cellulari presenti in un tessuto.
    Linee cellulari stabilizzate e/o immortalizzate
        fattori di trasformazione
        immortalizzazione di cellule mediata da oncogeni
        sistemi ibridi ottenuti da fusioni cellulari.
        Immortalizzazione specifica con agenti trasformanti: tumorigenesi diretta.
        Utilizzo di cellule postmitotiche (la cellula neuronale)
    Linee cellulari tumorali
    Linee cellulari staminali
        Differenziamento delle cellule multipotenti a specifici tipi cellulari

Metodi di Coltura di cellule
    Strategia delle colture cellulari,    Biologia delle cellule coltivate (Vantaggi e svantaggi delle colture cellulari) Approccio pratico alle colture cellulari. Equipaggiamento di laboratorio: Tecniche asettiche. Misure di sicurezza, rischi associati all'utilizzo di organismi geneticamente modificati. L'ambiente delle colture: substrati, medium di coltura, temperatura, fattori di crescita, tipi di siero e additivi chimici ecc. "Scaling-up" delle colture cellulari.
Ricerca di un substrato specifico. Adesione cellulare. Crescita su substrati specifici (polilisina, poliornitina, collagene). Cinetiche di crescita.
Metodi di valutazione della proliferazione cellulare, sopravvivenza e tossicita'
Tecniche di crescita. Co-colture. Colture a medium condizionati/frazionati. Camerette a compartimenti (camere di Campenot). Valutazione della crescita e migrazione ed invasivita' cellulare.
Tecniche di trasfezioni cellulari per lo studio dell'espressione genica e per l'analisi di proteine. Trasfezioni temporanee e stabili; vettori di trasformazione con promotori virali, per espressione inducibile, sistemi reporter
Sistemi di trasfezione (Calcio fosfato, i cationi lipidici, etc.).
Preparazioni per microscopia e sterilizzazione.
Il microscopio ottico ed a fluorescenza, tecniche di microscopia
Tecniche di immonocitochimica ed immunofluorescenza
Utilizzo di proteine chimeriche fluorescenti per lo studio dei compartimenti cellulari e le secrezioni cellulari in cellule vive.