CROMOSOMA ARTIFICIALE DI LIEVITI o Minicromosoma

Il cromosoma medio di lieviti è 100 volte più piccolo di quello medio dei mammiferi.

Tre elementi strutturali sono necessari al cromosoma di lieviti:

- origine di replicazione (ARS elements)
- centromeri (CEN elements)
- telomeri.

Il clonaggio di questi elementi ha permesso la costruzione di cromosomi artificiali per la clonazione di geni estremamente lunghi (400 kb) (approfondimenti).

MINICROMOSOMI
YEAST ARTIFICIAL CHROMOSOME YAC

I minicromosomi vengono cresciuti come vettori circolari in batteri, quindi linearizzati a livello dei telomeri e successivamente nel sito di restrizione per inserzione di geni estranei. I vettori lineari autonomi oltre a contenere ARS (Autonomous replication system), CEN (centromero di lieviti), TEL (telomero) devono contenere un marker selettivo per crescita in auxotrofia (ura3, leu2, trp1, hys3)

YAC cloning vector

possono essere inseriti diversi geni (anche codificanti una sola cascata metabolica)

> dimensione = >stabilità

viene cresciuto in E. coli come vettore circolare, quindi digerito con EcoRI, dando origine a due frammenti che costituiscono le braccia del cromosoma.