trasfezioni cellulari

METODI E APPLICAZIONI DEL TRASFERIMENTO GENICO
in cellule di eucarioti superiori

Trasferimento genico mediato da cromosomi: fusione cellulare

Consente di ottenere cellule immortalizzate da particolari cloni o colture cellulari altamente differenziate, ma a tasso di duplicazione basso o nullo (cellule post-mitotiche quali i neuroni)
Gli ibridomi possono mantenersi stabilmente in coltura oppure andare incontro ad un processo di de-differenziamento cellulare.
Il de-differenziamento e' generalmente dovuto alla perdita di uno o piu' cromosomi (puo' essere voluto per lo studio di espressione associato ad un singlolo cromosoma)

Gli ibridomi piu' frequenti sono stati realizzati ibridomi tra:

- cellule di topo (cellula tumorale murina con cellula differenziata murina)
- cellula di topo (cellula tumorale murina) con cellule differenziate umane per l'analisi di espressione di un cromosoma umano

Le cellule ibride topo-topo sono generalmente piu' stabili di quelle topo-uomo.
In tal caso si perdono piu' frequentemente i cromosomi umani.

GLI IBRIDOMI SERVONO PER:

alcune mappature cromosomiche
studi sulla regolazione TESSUTO-SPECIFICA di proteine
Gli ibridomi vengono largamente impiegati per la produzione di anticorpi monoclonali

DUE METODI PER OTTENERE IBRIDOMI:

1) fusione cellulare con EMAGGLUTININA del virus Sendai

2) fusione cellulare con PEG

NECESSITANO ENTRAMBI DI UN LARGO SCREENING PER FENOTIPO CELLULARE O MARKER CELLULARI.

TRASFERIMENTO GENICO MEDIATO DA CROMOSOMI Fusione di due cellule in una
singola cellula ibrida

combinazione del materiale cromosomico
delle due cellule madri

I nuclei si fondono tra loro; ma i cromosomi rimangono in genere distinti;

I caratteri della cellula figlia sono quelli presenti nelle due cellule di partenza amalgamati
gli ibridomi possono stabilizzarsi e generare linee cellulari altamente differenziate ad un particolare fenotipo

a volte con il proseguire della coltura i cromosomi individuali si possono perdere

vi e' la perdita del corrispondente fenotipo che e' quindi dovuto ad un preciso set di geni localizzati sul cromosoma scomparso

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METODO DI PREPARAZIONE DI IBRIDOMI DI MOTONEURONI PRIMARI IN COLTURA
CON CELLULE DI NEUROBLASTOMA DI TOPO

dettagli

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PROPRIETA' BIOLOGICHE DEGLI IBRIDOMI OTTENUTI PER IMMORTALIZZAZIONE
DI MOTONEURONI PRIMARI IN COLTURA CON CELLULE DI
NEUROBLASTOMA DI TOPO

dettagli

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RISPRISTINO DE FENOTIPO NEURONALE AD ALTA DIFFERENZIAZIONE CON TRATTAMENTO DI IDROSSIUREA (BLOCCA DUPLICAZIONE DEL DNA IMPEDENDO LA TRANSIZIONE G1/S)

dettagli

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FENOTIPO NEURONALE DI IBRIDOMI OTTENUTI PER IMMORTALIZZAZIONE
DI MOTONEURONI PRIMARI IN COLTURA CON CELLULE DI
NEUROBLASTOMA DI TOPO